Nat Neurosci:对小鼠,非人类灵长类动物和人类中功能不同的中间神经元进行病毒操作方法

2021-10-12 17:45:03 来源:
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大规模的RNA组研究者即将促使揭示在特定巨噬细胞子类中会从前隐含与神经细胞精神性疾病涉及的等位基因。理解和疗程这些性疾病的数据分析方法将需要靶向和驾驭特定神经细胞元冠状病毒的数据分析方法。因此,在值得注意哺乳动物和进化中会保持联系这些人群已显得至关重要。重组腺涉及病原体(rAAVs)是在神经细胞系统中会顺利进行等位基因传递的选用数据分析方法,对特定的神经细胞元社会性没有内在的功能性。系统的提升子推断出早已通过强制以单巨噬细胞分辨率顺利进行RNA组和微小遗传学研究者的新科技的最新转型而赢取用较慢。但对于提升子考虑的查找空间即便如此不小。为了比较大会我们的提升子考虑,写作者考虑专门研究者Scn1a的调控形势,Scn1a是在各不相同神经细胞元社会性中会隐含的等位基因,其破坏与严重的哮喘病涉及。为基础常用在后在后染色质DNA(scATAC-seq)图表的单巨噬细胞检测与跨物种的数列保守性相为基础,写作者在该等位基因靠近奥斯卡金像奖了十个候选调控数列。写作者明确了三种提升子,共同靶向隐含Scn1a的神经细胞元社会性的丰富性。其中会,一种特定的短调控数列尽可能将病原体隐含受限为隐含PV的皮质中会间神经细胞元(PV cIN)。

数据分析方法:四名受试者(两名男性/两名女性,比率22-57岁)接受了一项外科动手术,切除了小大脑秘密组织(颞叶和鲸鱼体)以疗程耐药哮喘。在所有的病例中会,每个旁观者都曾接受过一次全面性的动手术,置于硬膜下和/或尺度线圈顺利进行颅内监控,以明确哮喘发病的右方。从鲸鱼和颞叶取用300μm腌渍,在鲸鱼腌渍中会,病原体的靶向是membrane内陆海。在牛痘病原体后7~14d对养成的人腌渍顺利进行电生理就有。将养成的人腌渍转移到就有一楼。对固有膜和放电属性顺利进行数据分析。大鼠分别保持良好在17.8–26.1℃和30–70%的宏观室温和潮湿区域内。这些数值被密切监控和控制在啮齿动物迁来一楼。从史丹佛大学(MIT)的社会性中会授予了一只雌性普通狨猴(6岁左右)。成年(2岁)雄性猕猴(macacamulatta)来自加州大学戴维斯理工学院的加州国内哺乳动物研究者中会心。在小鼠大脑腌渍缓冲器(Zivic Instruments)上顺利进行冠状腌渍,并在冰冷的人工大结膜液(ACSF)中会解剖V1皮质。经过执行后,运常用运常用Nova-Seq S2 100循环试剂盒(Illumina)顺利进行DNA。

结果:在经常性或病理转型情况下(包括Dravet遗传性)检查回路成熟的早期动态的主要障碍是,在不运常用转等位基因动物的情况下无法进入特定的巨噬细胞子类。即使选用繁复的遗传方针,中年的PV cIN也很难成为靶标。考虑到它们的数量级(它们代表所有外周cIN的40%)并且显现出来得相对早期。更是广泛地说,在本研究者中会明确的提升子提供了不具特别临床意义的神经细胞元社会性的访问简而言之。最轻微的是,这些提升剂可以通过等位基因疗法或抑制神经细胞元活性而潜在地常用减轻Dravet遗传性的衰败症状。写作者证明了了大面积和浑身注射可常用有效率的病原体传递到小大脑。通过大面积注射,才会更是佳局灶性哮喘,PFC功能障碍或鲸鱼记忆障碍。相比之下,结构性引入病原体可常用需要全面干预的情况下,例如,纠正局限性哮喘发病或精神性疾病和神经细胞退行性性疾病。写作者的研究者证明,对调控元素的宽松鉴别为疗程环境中会特定巨噬细胞子类的获取用提供了红线。重要的是,证明了了我们的提升子考虑数据分析方法可推广到其他等位基因。总体而言,我们推断出了一个大七个针对各不相同神经细胞元社会性和中会枢神经细胞系统区域不具独特特异性的提升剂。即使选用了宽松的准则(对前提人群的功能性> 90%),我们的数据分析方法仍不具显着的成功率(> 20%)。此外,正如高度保守的数列所数据分析的那样,写作者测试的提升子集在包括进化在内的所有物种中会被证明了不具同等的功能性和有效率性。

Vormstein-Schneider, D., Lin, J.D., Pelkey, K.A. et al. Viral manipulation of functionally distinct interneurons in mice, non-human primates and humans. Nat Neurosci (2020).

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